СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СЛУЧНОЙ БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ

Серологические тесты стали основными методами в различных отраслях биологии и широко используются в медицине и ветеринарии. Без них трудно представить современные достижения в диагностике инфекционных болезней, судебной медицине, иммуногенетике, трансплантологии, систематике животных, растений и микроорганизмов.

Многие серологические реакции, которые стали классическими (РА, РСК, РП), имеют универсальный характер и нашли применение в самых различных отраслях науки и практики. Разработанный в одной области новый серологический тест впоследствии находит применение не только в смежных, но и в самых отдаленных отраслях. Например, реакция Кумбса, разработанная в изосерологии для определения резус фактора [4], позже нашла применение в диагностике инфекционных болезней [2], в иммуногенетике животных [3].

Серологические реакции, как правило, используются для выявления антигена или антител, тогда как в организме эти субстанции, в основном, находятся не в свободном виде, а в комплексе. Поэтому более перспективными являются разработка и применение методов, позволяющих обнаружить иммунные комплексы.

Почти все серологические реакции, применяемые в ветеринарии, первоначально предназначены для применения в других отраслях и лишь потом приняты для диагностики болезней животных. Например, реакция связывания комплемента, основанная на использовании в качестве комплемента сыворотку крови морской свинки, стала одним из основных серологических тестов в медицине. Позже РСК без каких-либо больших изменений была принята в ветеринарной лабораторной практике. Между тем специальные исследования показали, что замена комплемента морской свинки в указанной реакции сывороткой крови крупного рогатого скота позволяет повысить эффективность диагностических исследований [2]. В некоторых случаях целесообразно в качестве комплемента использовать сыворотку крови лошади [5].

Были проведены сравнительные исследования реакции связывания комплемента (РСК), реакции связывания комплемента лошади (РСКЛ) и карт теста (CATT/T evansi) для диагностики трипаносомозов лошадей в Республике Казахстан. Для оценки соответствия между тремя тестами использовался тест каппы Коэна. Чувствительность РСК составила 57,2 % (CI 31,5—79,5 %), специфичность 95,8 % (CI 89,2—98,5 %), РСКЛ 80,6 % (CI 44,1—95,6 %) и 99,5 % (CI 90,7—100 %), CATT 80,2 % (CI 44,5—95,2 %) и 98,5 % (CI 79,5—99,9 %) соответственно. Серораспространение трипаносомозов лошадей в Казахстане было оценено в 16,4 % (CI 9,4—27,0 %). Таким образом, для эпизоотологических исследований и контроля трипаносомозов лошадей серологические тесты оказались приемлемыми, так как они имеют высокую специфичность и удовлетворительную чувствительность [6].

В 1975 г. Т. Сайдулдин разработал высокочувствительный тест — реакцию связывания конглютинирующего комплекса. Этот тест посднее был назван реакцией Сайдулдина (РС). Этот метод основан на взаимоотношении комплекса антиген-антитело с конглютинирующим комплексом. В РС применяются те же компоненты и оборудования, как в РСК. Разница заключается в том, что комплемент морской свинки заменяется комплементом крупного рогатого скота [1].

Цель исследований сравнить серологические методы диагностики (КБР, РС) случной болезни лошадей.

Материал и методы исследований. Исследования были проведены в благополучных и неблагополучных по случной болезни коневодческих хозяйствах Алматинской, Акмолинской и Костанайской областях Республики Казахстан.

РСК ставили согласно наставлении «Диагностика трипаносомозов животных» Комитета Ветеринарии МСХ РК, утвержденной 3 февраля 1999 г. [90].

РС осуществляли согласно наставлении Комитета Ветеринарии МСХ РК, утвержденной 19 мая 1999 г. При этом конглютинирующую сыворотку титровали по схеме, указанной в таблице 1.

Таблица 1.

Схема титрования конглютинирующей сыворотки

Схема постановки главного опыта РС приведена в таблице 2.

Таблица 2.

Схема постановки главного опыта РС

Реакцию учитывали по степени конглютинации эритроцитов:

·     задержка конглютинации — эритроциты оседают на дно пробирки в виде «пуговки», при встряхивании образуют равномерную взвесь (рисунок 1).

Рисунок 1. Задержка конглютинации. Положительная реакция РС

·     не полная конглютинация — эритроциты оседают на дно пробирки в виде «пуговки», вокруг образуется слабый зонтик. При встряхивании на фоне свободных эритроцитов появляются мелкие хлопья, незначительное просветление жидкости;

·     полная конглютинация — эритроциты оседают на дно пробирки в виде «зонтика», при встряхивании на белом фоне появляются крупные хлопья (рисунок 2).

Результаты исследований и обсуждения.

РСК основана на обнаружения антител, РС — иммунных комплексов. Результаты исследований приведены в таблице 3.

Из 76 проб из конводческих хозяйств Алматинской области 5 показали положительный результат в РСК, составив 6,58 %. 2 сыворотки крови в РСК дали самозадержку реакции, то есть в пробирке без антигена (контроль с физиологическим раствором) произошла задержка гемолиза.

8 (10,5 %) проб дали положительный результат в РС, 5 из них подтвердили положительный результат РСК и 3 дополнительно выявили больных животных.

Рисунок 2. Полная конглютинация эритроцитов, отрицательный результат реакции

Таблица 3.

Сравнительные результаты серологических исследований при случной болезни лошадей

При клиническом обследовании положительно реагирующих животных у одной лошади из 3-х дополнительных выявили симптомы нервной формы случной болезни (рисунок 3). Животное было истощено, отмечали искривление губ, ассимметричность ущей, острие краев глаз, при ходьбе походка шаткая, задние ноги перекашиваются, и было заметно цоканье (рисунок 4).

Рисунок 3. Истощение, искривление губ

Из хозяйства Акмолинской области были исследованы 25 сывороток крови. Они все показали отрицательный результат в РСК, а 2 пробы — положительный результат в РС. 39 пробы, принадлежащих Костанайской области были отрийательными и в РСК, и в РС.

Таким образом, чувствительность РС выше по сравнению с РСК. Положительные результаты РС подтверждаются с клиническими признаками случной болезни лошадей.

Рисунок 4. Ассимметричность ушей, острие краев глаз

Список литературы:
1.    Наставление по диагностике трипаносомозов животных. — Астана, 1999. — 48 c.
2.    Сайдулдин Т. Неполные антитела и их выявление в бактериальном варианте реакции Кумбса: дисс. … канд. вет. наук, М. 1970. — 229 с.
3.    Тихонов В.Н. Использование групп крови в селекции животных (с основами иммуногенетики). — М.: Колос, 1967. — 391 с.
4.    Coombs R.R.A., Mourant A.E., Race R.R. A new test for the detection of weak and “incomplete” Rh agglutinins //Brit. J. Exp. Path. — 1945. — Vol. 26, — P. 255—266.
5.    Claes F; Ilgekbayeva, GD; Verloo, D; et al. Comparison of serological tests for equine trypanosomosis in naturally infected horses from Kazakhstan// Veterinary Parasitology. Volume: 131. Issue: 3—4. — Pages: 221—225 Published: AUG 10 2005.