ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ ЭОЗОНОФИЛОВ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ

Проблема атопического дерматита с каждым годом становится более актуальной в связи с тенденцией к росту, усилением тяжести клинических проявлений, снижением эффективности базисной терапии, развитием осложнений. Атопический дерматит (устар. диффузный нейродермит) — хронический аллергический дерматит; заболевание, которое развивается у лиц с генетической предрасположенностью к атопии, имеет рецидивирующее течение, возрастные особенности клинических проявлений. Характеризуется экссудативными и (или) лихеноидными высыпаниями, повышением уровня сывороточного IgE и гиперчувствительностью к специфическим (аллергенным) и неспецифическим раздражителям. Имеет чёткую сезонную зависимость: зимой — обострения или рецидивы, летом — частичные или полные ремиссии [1].

Частота атопического дерматита, по данным эпидемиологических исследований, колеблется в разных странах от 9 % до 24 %, в России распространенность этого заболевания составляет от 1,3 % до 15,6 %. Современные представления об атопическом дерматите как многофакторном заболевании, определяют широту охвата исследуемых аспектов его патогенеза [2].

Ведущая роль в развитии атопического дерматита принадлежит эндогенным факторам (наследственность, атопия, гиперреактивность кожи, нарушение функциональных и биохимических процессов в коже), которые в сочетании с различными аллергенными и неалергенными экзогенными факторами (психоэмоциональные нагрузки, табачный дым) приводят к развитию клинической картины атопического дерматита. В основе развития атопического дерматита лежит генетически определённая (мультифакториальный полигенный тип наследования) особенность иммунного ответа на поступление аллергенов. Характерные черты иммунного ответа атопиков: преобладание Т-хелперов II, гиперпродукция общего IgE и специфических IgE-антител. Склонность к гиперреактивности кожи — основной фактор, определяющий реализацию атопической болезни в виде атопического дерматита. Риск развития атопического дерматита у детей выше в семьях, где родители имеют аллергические заболевания или реакции: если оба родителя здоровы, риск развития у ребёнка атопического дерматита составляет 10—20 %, если болен один из родителей — 40—50 %, если больны оба родителя — 60—80 % [3].

Кроме этого, в последние годы отмечена существенная роль изменений в различных врожденных механизмах защиты при развитии аллергодерматозов, а особенно — в функциональной активности эозинофилов.

С учетом этого, целью работы явилась оценка функциональной активности эозинофилов у больных атопическим дерматитом.

Задачи исследования:

1.  Изучить функциональную активность эозинофилов у здоровых людей.

2.  Изучить функциональную активность эозинофилов у больных с различными формами атопического дерматита.

Известно, что реализация эффекторного потенциала гранулоцитов, а в том числе и эозинофилов, зависит от состояния кислородного метаболизма, а именно, от «респираторного взрыва». При переходе клеток в состояние активации резко усиливается окисление глюкозы, генерируются супероксидные анион-радикалы и H2О2, что сопровождается хемилюминесценцией. Показано, что хемилюминесценция является информативным методом оценки тяжести течения, прогноза воспалительного процесса, позволяющим также контролировать эффективность лечения.

В литературе приводятся единичные данные по исследованию хемилюминесценции нейтрофилов при атопическом дерматите. Вместе с тем отсутствуют данные о хемилюминесценции эозинофилов.

Метод хемилюминесценции обладает тем преимуществом,что, во-первых, он обычно не связан с изменением хода процессов в растворах, клетках или даже целых тканях, где регистрируется свечение, а во-вторых, весьма чувствителен при обнаружении именно высокореакционных радикалов [4].

Учитывая это, мы изучили состояние функциональной активности эозинофилов у больных с различными формами атопического дерматита по спонтанной и люминол-индуцированной хемилюминесценции. Следует признать, что спонтанная хемилюминесценция для изучения образования радикалов клетками в настоящее время используется редко по причине слабости свечения.

Функциональную активность эозинофилов периферической крови проводили с помощью спонтанной и люминол-индуцированной хемилюминесценции с применением реагентов фирмы «ДиаэМ» (г. Москва) по стандартным методикам. Оценку хемилюминесценции производили на аппарате «Биохемилюминометр БХЛ-06» путем подсчета светосуммы импульсов за одну минуту.

Роль эозинофилов в патогенезе атопического дерматита подтверждается обнаружением эозинофильных протеинов в воспаленной коже. Как известно, эозинофильные гранулоциты содержат в себе многочисленные гранулы ферментов и различных медиаторов (главный основной белок, эозинофильный катионный протеин, эозинофильная пероксидаза, эозинофильный нейротоксин, лейкотриен С4, простагландин Е2, арилсульфатаза В, фосфолипаза Д) способствующие тому, что эозинофилы становятся центральным повреждающим фактором, приводящим к возникновению и поддержанию воспалительного процесса в коже при атопическом дерматите [5].

Установлена корреляция между активностью заболевания и уровнем эозинофильных катионных белков эозинофильных гранул в сыворотке крови, поэтому их определение может быть использовано для мониторирования процесса. В периферической крови при слабой активности воспалительного процесса эозинофилия отмечена у 41 %, при умеренной — у 77 %, при высокой практически у 100 % больных атопическим дерматитом. Рисунок 1.

Рисунок  1. Процентное отношение функционально активных эозинофилов в зависимости от активности воспаления

При анализе хемилюминесценции в кюветы люминометра добавляли 300 мкл раствора Хенкса без фенолового красного и вносили суспензию исследуемых клеток (эозинофилов), чтобы конечная концентрация составила 0,5 млн/мл. Хемилюминесценцию определяли, как правило, в течение 10—20 мин, фиксируя спонтанную и люминол-индуцированную хемилюминесценцию.

Учитывали максимальные значения хемилюминесценции в мВ и сумму импульсов.

Результаты исследований показали, что больные атопическим дерматитом имеют исходно высокий уровень показателей спонтанной и стимулированной хемилюминесценции по сравнению с донорами. Так у больных с эритематозно-сквамозной формой заболевания показатель спонтанной и стимулированной хемилюминесценции в 1,8 и в 1,6 раза, соответственно, превышало эти показатели у доноров. У больных с лихеноидной формой показатели хемилюминесценции также были выше в 1,7 и в 1,2 раза, соответственно, выше нормальных значений. Рисунок 2.

Таким образом, эозинофилы выполняют важную роль клеток-эффекторов, повреждающих окружающие ткани, и, возможно, могут определять и контролировать активность воспалительного процесса в коже.

Рисунок 2. Число функциональных эозинофилов в разных исследуемых группах при спонтанной и люминол-индуцированной хемилюминесценции

Список литературы:
1.    Статья Владимиров Ю.А., Проскурнина Е.В. «Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция» Успехи биологической химии, 2009, Т. 49, С. 341—388 [4].
2.    Статья Е.Н. Волкова «Атопический дерматит» журнал Лечащий Врач [1; 2].
3.    Статья Сорока Н.Ф., Савченко М.А.«Современные представления о роли эозинофолов в организме и гиперэозинофильных синдромах» [5].
4.    Источник: интернет-издание «MED+info» раздел «Советы специалистов» www.medinfo.ru http://www.eurolab.ua/encyclopedia/565/47127/ [3].