ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ КОНСЕРВАНТА К3ЭДТА НА КАЧЕСТВО ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

В условиях современных лечебно-профилактических учреждений клинический анализ крови является одним из самых частых и востребованных лабораторных исследований. Он достаточно информативен на всех этапах диагностики и лечения, достаточно дешев и выполняется всеми клинико-диагностическими лабораториями. Наиболее широко применяется клинический анализ, при котором определяется скорость оседания эритроцитов (СОЭ), абсолютное количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уровень гемоглобина, эритроцитарные индексы (MCV, MCH, MCHC) и лейкоцитарная формула [2]. Как и в любом лабораторном исследовании, в клиническом анализе крови можно условно выделить три этапа: преаналитический, аналитический и постаналитический.

Количество ошибок, совершенных на преаналитическом этапе, который частично проходит вне лаборатории, достигают, по оценкам различных авторов, 60—80 % от общего количества всех ошибок. На этапе проведения анализа количество ошибок существенно снижается благодаря внутреннему контролю качества [1]. Недостаточно высокое качество гематологических мазков является одной из подобных ошибок и приводит к дополнительным трудностям при подсчете лейкоцитарной формулы в окрашенном мазке или вовсе к невозможности ее подсчета.

В условиях современной лаборатории клинический анализ крови выполняется на автоматических гематологических анализаторах из капиллярной или венозной крови. Для выполнения исследования кровь берется в пробирку с антикоагулянтом. Самыми распространёнными антикоагулянтами для клинического анализа крови являются К₃ЭДТА или К₂ЭДТА.

Исследование проводилось на базе клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ «ГП № 115» ДЗМ и лаборатории кафедры физиологии, экологии человека и медико-биологических знаний Московского государственного областного университета. Клинико-диагностическая лаборатория работает с капиллярной кровью, которая берется из мякоти пальца в пробирки Microvette с заводским напылением К₃ЭДТА. Методика приготовления мазков для последующей микроскопии, принятая в лаборатории, состоит в том, что на заранее подготовленное сухое обезжиренное предметное стекло наносится капля крови, взятая непосредственно с места прокола одноразовой сухой стерильной пластиковой пипеткой, далее краем шлифовального стекла плавным движением распределяется по предметному стеклу [1]. Достаточно часто мазки, приготовленные этим способом, не отвечали требованиям к качеству из-за их неравномерной толщины и неравномерного распределения клеток.

Целью исследования стала проверка предположения, что нанесение капли крови на стекло сухой пипеткой или непосредственно из пальца может стать причиной низкого качества препарата из-за формирования микросгустков, возникающих при контактной коагуляции крови из поврежденных капилляров и стенок пипетки. Микросгустки не позволяют равномерно распределить кровь на предметном стекле, могут повреждать лейкоциты в мазке.

Для приготовления препаратов предложен альтернативный способ. Суть предложенного способа состоит в том, чтобы минимизировать количество и выраженность микросгустков. Для достижения поставленной цели необходимо наносить кровь на предметное стекло не с места прокола, а непосредственно из пробирки Microvette, в которой присутствует консервант К₃ЭДТА. Предложение метода основано на том, что 2- и 3- замещенные соли ЭДТА, связывая ионы Са⁺⁺, ингибируют коагуляцию. Кровь, содержащая консервант, позволит получить более качественные препараты для микроскопии, что позволит уменьшить риск аналитических ошибок.

Для сравнения методов были приготовлены мазки крови пятидесяти случайных пациентов. В каждом случае один мазок был выполнен стандартным способом, другой — из крови, содержащей ЭДТА. Мазки были высушены, зафиксированы фиксатором-красителем Май-Грюнвальда и окрашены по методу Романовского. При микроскопическом исследовании методом световой микроскопии качество препаратов оценивалось по нескольким параметрам: расположение форменных элементов крови в один слой или их слипание, количество полуразрушенных и разрушенных лейкоцитов, равномерность распределения клеток по мазку. Приведенные параметры соответствуют наиболее частым причинам ошибок при подсчете форменных элементов крови или выбраковки мазков. Сравнительные данные по качеству препаратов приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Сравнительная характеристика гематологических препаратов, приготовленных стандартным способом и с добавлением К₃ЭДТА

Для наглядности данные эксперимента представлены в рисунке 1.

Рисунок 1. Сравнительная характеристика гематологических препаратов, приготовленных стандартным способом и с добавлением К₃ЭДТА

Исходя из полученных данных, можно говорить о том, что добавление в кровь консерванта ЭДТА существенно снижает риск приготовления некачественных препаратов для микроскопии. В процентном соотношении использование ЭДТА уменьшило количество препаратов, в которых клетки расположены в несколько слоев и отсутствует выраженная «щёточка» с 30 % до 2 %; количество препаратов с большим количеством разрушенных и травматически поврежденных клеток уменьшилось с 24 % до 4 %. Препараты, в которых клетки равномерно распределены по мазку и отсутствует их скученность, приготовленные без использования консерванта, составили 50 %, тогда как использование ЭДТА при приготовлении мазков снизило этот показатель до 14 %. На качество окрашивания форменных элементов крови использование консерванта существенно не повлияло: 96 % препаратов цельной крови и 94 % препаратов с ЭДТА получили высокую оценку по этому критерию.

Проведенный эксперимент наглядно показал, что для снижения количества аналитических ошибок и увеличения показателей качества лабораторных исследований препараты крови для микроскопии целесообразно готовить не из цельной крови, взятой непосредственно из пальца, а из образца, содержащего консервант К₃ЭДТА. Метод в настоящее время используется в клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ «ГП № 115» ДЗМ.

Список литературы:
1. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. Гематологические исследования. Коагулогические исследования. Химико-микроскопические исследования [под ред. В.В. Меньшикова] — М., Лабора, 2008. 448 с.
2. Погорелов В.М. Лабораторно-клиническая диагностика анемий / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец, Л.Г. Ковалева. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. 173 с.