Статья:

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРИЗИДОНА В КОМБИНИРОВАННЫХ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ПРЕПАРАТАХ

Конференция: XXXII Студенческая международная заочная научно-практическая конференция «Молодежный научный форум: естественные и медицинские науки»

Секция: 1. Химические науки

Выходные данные
Раделюк И.М. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРИЗИДОНА В КОМБИНИРОВАННЫХ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ПРЕПАРАТАХ // Молодежный научный форум: Естественные и медицинские науки: электр. сб. ст. по мат. XXXII междунар. студ. науч.-практ. конф. № 3(31). URL: https://nauchforum.ru/archive/MNF_nature/3(31).pdf (дата обращения: 18.08.2018)
Лауреаты определены. Конференция завершена
Эта статья набрала 0 голосов
Мне нравится
Дипломы
лауреатов
Сертификаты
участников
Дипломы
лауреатов
Сертификаты
участников
на печатьскачать .pdfподелиться

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРИЗИДОНА В КОМБИНИРОВАННЫХ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ПРЕПАРАТАХ

Раделюк Иван Михайлович
магистрант Павлодарского государственного университета, Республика Казахстан, г. Павлодар
Амриев Ракиш Амриевич
научный руководитель, д-р хим. наук, проф. Павлодарского государственного университета, Республика Казахстан, г. Павлодар

Туберкулез (ТБ) — это излечимое заболевание, от которого до сих пор ежегодно во всем мире умирает около 1,4 млн человек и которое является основной причиной смертности среди людей, живущих с ВИЧ/СПИД. Из 9,4 млн новых случаев заболевания туберкулезом каждый год 440 тысяч — это пациенты с формами, устойчивыми к нескольким противотуберкулезным препаратам, что означает, что они не поддаются лечению при помощи двух основных антибиотиков, которыми обычно лечится туберкулез. За последние десять лет лекарственно-устойчивый туберкулез (ЛУ-ТБ) развился приблизительно у пяти миллионов человек, однако менее 1% из них имели доступ к адекватному лечению, и полтора миллиона из них погибли [2, с. 15].

Теризидон включен в руководства ВОЗ как бактериостатический препарат второго ряда орального применения Группы 4 — препараты, рекомедованные для лечения лечения активного легочного и внелегочного туберкулеза (включая почечное заболевание), когда вызывающие заболевание организмы чувствительны к этому препарату и когда лечение основными противотуберкулезными препаратами оказалось недостаточным [1, с. 6].

Определение теризидона затруднено тем, что молекула циклосерина обладает высокой полярностью, имеет функциональные группы, которые не чувствительны к ультрафиолетовому поглощению, а также недостаточно стабильна в кислотной среде. Молекула теризидона с течением времени гидролизирует, с образованием двух молекул циклосерина и терефтальдегида [3, с. 37199].

Целью данной работы является разработка быстрой, простой и точной методики определения теризидона в тесте «Растворение» с использованием метода ВЭЖХ, а также сравнение валидационных характеристик предложенной методики по показателям селективности, линейности, правильности, прецизионности.

Методика выполнения анализа.

Испытание проводят в соответствии с требованиями ГФ РК I, т. 2, 2.9.3, используя прибор с корзинкой. Среда растворения – буферный раствор с рН 3.0, объем среды растворения – 500 мл, температура среды растворения – 37 ± 0.5ºС, скорость вращения корзинки – 100 об/мин, время растворения – 45 мин.

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (ГФ РК I, т. 1, 2.2.29). Для испытания в корзинку помещают 1 таблетку.

Через 45 мин отбирают 100 мл раствора из центра сосуда для растворения и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата.

5.0 мл полученного фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора буферным раствором с рН 3.0 до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

По 20 мкл испытуемого раствора и 20 мкл раствора сравнения попеременно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ - детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из растворов в следующих условиях:

·     колонка из нержавеющей стали размером 250 мм x 4.6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм или аналогичная;

·     подвижная фаза: ацетонитрил для хроматографии Р1 буферный раствор с рН 3.0 (20:80), дегазированная любым удобным способом;

·     скорость подвижной фазы – 1.2 мл/мин;

·     детектирование - при длине волны 285 нм;

·     температура колонки - 30оС;

·     время хроматографирования - 15 мин.

Содержание протионамида (теризидона) (Х), перешедшего в раствор из таблетки, в процентах, вычисляют по формуле:

                                             (1)

где:  – среднее значение площадей пиков протионамида (теризидона), вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

 – среднее значение площадей пиков протионамида (теризидона), вычисленное из хроматограмм раствора сравнения;

 – масса навески стандартного образца (СО) протионамида (теризидона), в миллиграммах;

 – содержание протионамида (теризидона) в СО протионамида (теризидона), в процентах;

 – содержание протионамида (теризидона), указанное в разделе «Состав на одну таблетку», в миллиграммах.

Приготовление раствора сравнения: 50.0 мг теризидона (СО НД фирмы) и 50 мг протионамида (СО НД фирмы) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл буферного раствора с рН 3.0, нагревают на водяной бане при температуре 40ºС в течение 20 минут, охлаждают и доводят тем же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм.

5.0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки буферным раствором с рН 3.0 и перемешивают.

Приготовление буферного раствора с рН 3.0: 0.5 г натрия октаносульфоната растворяют в 800 мл воды, прибавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют раствор натрия гидроксида 1М до рН 3.0±0.05, доводят объем раствора водой до 1 литра и перемешивают.

Валидация разработанной методики.

Валидацию методики теста «Растворение» проводили в соответствии с Государственной фармакопеей Республики Казахстан [4, с. 100] по следующим характеристикам: селективность, линейность, диапазон применения, сходимость.

Селективность.

Проводили анализ образцов стандартного раствора теризидона и раствора плацебо. На хроматограммах образцов плацебо не наблюдалось пиков со временем удерживания, соответствующим времени удерживания теризидона. Поскольку проводилось исследование относительно полученного терефтальдегиа, в результате гидролиза теризидона, было указано соответствующее время удерживания пика терефтальдегида. Соответствующие хроматограммы приведены ниже на рисунках 1-3.

 

Рисунок 1. Хроматограмма раствора плацебо

 

Рисунок 2. Хроматограмма раствора стандартного образца терефтальдегида

 

Рисунок 3. Хроматограмма раствора стандартного образца теризидона

 

Линейность и диапазон применения

 

Проводили анализ пяти образцов с прибавлением стандартного раствора теризидона до получения следующих концентраций: 0,04 мг/мл, 0,045 мг/мл, 0,05 мг/мл, 0,055 мг/мл, 0,06 мг/мл. По полученным значениям был построен калибровочный график, приведенный на рисунке 4.

 

Рисунок 4. Калибровочный график стандартного раствора теризидона

 

Таблица 1.

Построение калибровочного графика стандартного раствора теризидона

С, мг/мл

0,000

0,040

0,045

0,050

0,055

0,060

S пика

0,00000

201,12343

230,93066

249,61472

285,17505

295,73154

 

 

Сходимость.

Степень согласования результатов при анализах однородного образца, выполненных одним аналитиком при одних и тех же условиях (реактивы, оборудование, обстановка и др.), и в течение короткого промежутка времени соответствует критерию приемлемости: не более 2 процентов для 6 измерений.

Таблица 2.

Сходимость результатов

S пика

1

288,52576

2

286,25864

3

289,49384

4

286,92462

5

291,12589

6

290,36514

Среднее значение

288,78

Стандартное отклонение

1,92

 

 

Заключение.

Разработана методика определения теризидона в комбинации с протионамидом, используемая в тесте «Растворение» с использованием метода ВЭЖХ с УФ-детектированием. Методика показала высокую чувствительность, точность и воспроизводимость. Данная методика может быть использована на стадии клинических и фармакокинетических исследований новых воспроизведенных лекарственных средств теризидона.

 

Список литературы:

1. Медикаменты для лечения лекарственно-устойчивого туберкулеза под микроскопом / ВОЗ / Март 2011 / С.6.

2. Blanc L, Falzon D, Fitzpatrick C, Floyd K, Garcia I, Gilpin C, et al. Global tuberculosis control: WHO report 2010 / Глобальный контроль над туберкулезом.

3. Patel U., Y.P. Yan, F.W. Hobbs, Jr., J. Kaczmarczyk, A.M. Slee, D.L. Pompliano, M.G. Kurilla, E.V. Bobkova. Oxazolidinones Mechanism of Action: Inhibition of the First Peptide Bond Formation / Vol. 276, № 40, Issue of October 5, Р. 37199–37205, 2001

4. Государственная фармакопея Республики Казахстан / Том 1 / С.100