Количественное определение тинидазола и флуконазола в мягкой трёхкомпонентной лекарственной форме

QUANTITATIVE DETERMINATION OF TINIDAZOLE AND FLUCONAZOLE IN A MILD THREE-COMPONENT DOSAGE FORM

Anna Zamaraeva

Post-Graduate Student of Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia, Russia, Tyumen

Natalya Bessonova

PhD in Biology, Associate Professor of Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia, Russia, Tyumen

Tatyana Kobeleva

Doctor of Pharmacy, Professor, Head of the Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia, Russia, Tyumen

Alik Sichko

Doctor of Pharmacy, Professor, Professor, Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia, Russia, Tyumen

Аннотация. В настоящее время не наблюдается снижения потребности населения в лекарственных препаратах, применяемых для дерматопротекторной терапии и профилактики дерматологических заболеваний [5]. Следовательно, расширение номенклатуры дерматологических средств представляется особенно актуальным и перспективным [1, 7]. Лекарственная форма, состоящая из 0,1 г тинидазола, 0,1 г флуконазола и геля «Тизоль» до 10 г, названная нами «Тинифлукозоль», может найти применение в дерматологии и гинекологии, как бактерицидное и противогрибковое средство. Целью исследования является создание методики количественного определения тинидазола и флуконазола в мягкой лекарственной форме на титансодержащей основе. Для проведения анализа использовали субстанции, этанольные растворы тинидазола и флуконазола, мазь под условным наименованием «Тинифлукозоль», содержащую по 1,0 % препаратов в геле «Тизоль». В ходе исследования применяли метод спектрофотометрии в ультрафиолетовой области, используя прибор марки СФ-2000. Изучение спектров поглощения и проведение статистической обработки результатов исследования позволило установить, что спектрофотометрическое определение флуконазола и тинидазола можно проводить при длинах волн 261 нм и 310 нм, с относительной погрешностью ±1,74 % и ±1,54 %, соответственно. В результате анализа мягкой лекарственной формы определено, что содержание тинидазола находится в пределах 0,1018-0,1072 г, флуконазола – 0,0876-0,1132 г, что соответствует допустимым нормам. На основании проведенных исследований разработали и предложили методику количественного определения флуконазола и тинидазола в мази «Тинифлукозоль» спектрофотометрическим методом, позволяющую устанавливать содержание препаратов в лекарственной форме с ошибкой, не превышающей нормативные отклонения.

Abstract. At the present time do not decrease the population's needs in medical products used to dermatoprotectornoe therapy and prevention of dermatological diseases [5]. Therefore, the expansion of the range of dermatological products is particularly relevant and promising [1, 7]. The dosage form consisting of 0.1 g of tinidazole, 0.1 g of fluconazole and gel "Tizol" up to 10 g, called by us "Tiniflukozol", can be used in dermatology and gynecology as a bactericidal and antifungal agent. The aim of the study is to develop a method for the quantitative determination of tinidazole and fluconazole in a mild dosage form on a titanium-containing basis. For the analysis, we used substances, ethanol solutions of tinidazole and fluconazole, an ointment under the conditional name "Tiniflukozol", containing 1.0% of the preparations in the "Tizol" gel. During the study, the method of spectrophotometry in the ultraviolet region was used, using a device of the SF-2000 brand. The study of absorption spectra and statistical processing of the results of the study allowed us to establish that the spectrophotometric determination of fluconazole and tinidazole can be performed at wavelengths of 261 nm and 310 nm, with a relative error of ±1.74% and ±1.54%, respectively. As a result of the analysis of the soft dosage form, it was determined that the content of tinidazole is in the limit of 0.1018-0.1072 g, and fluconazole-0.0876-0.1132 g, which corresponds to acceptable standards. Based on the conducted research, we developed and proposed a method for quantitative determination of fluconazole and tinidazole in tiniflukozol ointment using a spectrophotometric method, which allows us to determine the content of drugs in the dosage form with an error not exceeding the standard deviations.

Ключевые слова: тинидазол; флуконазол; гель «Тизоль»; количественный анализ; спектрофотометрия.

Keywords: tinidazole; fluconazole; Tizol gel; quantitative analysis; spectrophotometry.

Тинидазол представляет собой химиотерапевтическое средство, которое оказывает бактерицидное действие на анаэробные микроорганизмы и обладает противопротозойной активностью. Лекарственный препарат сочетают с антибиотиками, сульфаниламидами, противогрибковыми препаратами, хлоргексидином биглюконатом, фторхинолонами и другими соединениями. Флуконазол относится к синтетическим противогрибковым лекарственным препаратам производным триазола.

Нами предложена мягкая лекарственная форма, состоящая из 0,1 г флуконазола, 0,1 г тинидазола и 9,8 г геля «Тизоль», названная нами «Тинифлукозоль». Благодаря сочетанию указанных препаратов мазь может найти перспективное применение в дерматологии и гинекологии, как бактерицидное и противогрибковое средство. Титансодержащий гель относится к малотоксичным основам, обладающим фармакологическими свойствами. Использование в качестве основы тизоля позволяет повысить проводимость лекарственных препаратов через ткани и кожу, а также добиться противовоспалительного, анальгетического, антисептического и противозудного действия [2, 6]. Для установления качества изготовления мягкой лекарственной формы «Тинифлукозоль» необходимо совершенствовать существующие и разрабатывать новые способы количественного анализа компонентов в мази [3, 4].

Для количественного определения двух соединений в лекарственной форме с гелем «Тизоль» рационально использовать этанол. Поэтому приготовили этанольные растворы тинидазола и флуконазола и сняли спектры поглощения в ближней ультрафиолетовой области. Оба лекарственных препарата поглощают свет в пределах длин волн 215 - 330 нм. На спектре поглощения тинидазола в этаноле (рис. 1, кривая 1) имеется две полосы поглощения. Первая полоса (менее выражена) имеет максимум поглощения при длине волны 229 - 231 нм (e = 3075,0), вторая (более резко выражена) с максимальным поглощением при λ = 309 - 311 нм (e = 8387,50). Кроме того, на кривой наблюдается один минимум поглощения при 260 - 262 нм (e = 1412,50).

Спектр флуконазола в этаноле (рис.1, кривая 2) имеет полосу поглощения с максимумом при λ = 261 нм (e = 478,50). В пределах длин волн 275 - 355 нм наблюдается минимальное поглощение света.

Рисунок 1. Зависимость поглощения этанольных растворов тинидазола (1 - С = 8,0·10^-5 моль/л) и флуконазола (2 - С = 8,0·10^-4 моль/л) от длины волны

Согласно предварительным опытам установлено, что тинидазол и флуконазол в этанольных растворах подчиняются основному закону поглощения, не взаимодействуют друг с другом. Следовательно, общее поглощение смеси по всем длинам волн - аддитивные величины и можно использовать в анализе метод К. Фирордта. Для применения данного метода необходимо знать молярные коэффициенты поглощения в максимумах и минимумах в пределах определенных концентраций лекарственных препаратов.

Нами измерены оптические плотности модельных этанольных растворов исследуемых веществ при двух аналитических длинах волн, рассчитаны молярные коэффициенты поглощения и составлена система уравнений.

Рисунок 2. Кривая зависимости ε (тин) - ε (флук) от длины волны

Для нахождения оптимальных длин волн при количественном определении исследуемых лекарственных препаратов в смеси спектрофотометрическим методом строили кривую зависимости ε(тин)-ε(флук) от λ (рис. 2). Максимум и минимум на кривой соответствует аналитическим длинам волн. Минимум на кривой наблюдается при длине волны 261 нм, который соответствует максимуму поглощения флуконазола. На приведенной кривой резко выражен максимум при длине волны 311 нм, который находится вблизи второго максимума поглощения тинидазола (λ = 310нм). Полученные результаты свидетельствуют, что за оптимальные длины волн при анализе тинидазола и флуконазола в смеси необходимо брать 261 нм и 310 нм (рис.1, кривые 1, 2).

Для подтверждения полученных результатов, приведенных на рисунке 2, нами построена кривая в координатах ε(флук)/ε(тин) – λ, нм (рис. 3). На ней наблюдается максимум с λ = 261 нм, который соответствует экстремальной точке в спектре флуконазола.

Рисунок 3. Кривая зависимости ε(флук)/ε(тин) от длины волны

На спектре рисунка 3 имеется минимум в пределах длин волн 275 - 355 нм. Наличие такой площадки на кривой свидетельствует о возможности использования видоизмененного способа К. Фирордта в количественном анализе при концентрации флуконазола в смеси меньшей, чем 8,0·10^-4 моль/л (Рис. 1, кривая 2). Поэтому, исходя из опытных данных, за аналитические длины волн нами приняты λ = 261 нм и λ = 310 нм, отвечающие максимумам поглощения в спектрах флуконазола и тинидазола, соответственно.

Обозначив молярные концентрации флуконазола через C₁, моль/л, молярные коэффициенты поглощения ε₁(261), ε₁(310), а тинидазола - С₂, моль/л, ε₂(261), ε₂(310) выразили систему уравнений при ε₁(310) = 0 следующим образом:

А(261) = ε₁(261)·С₁ + ε₂(261)·С₂

А(310) = ε₂(310)·С₂

После решения системы уравнений концентрации С₁ и С₂ равны:

Значения молярных показателей поглощения для расчета концентраций С₁ и С₂ приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Данные расчета ε для тинидазола и флуконазола

Для разработки методики спектрофотометрического количественного определения тинидазола и флуконазола в мягкой лекарственной форме готовили модельную этанольную смесь с точной концентрацией ингредиентов.

Анализ проводили следующим способом: в мерную колбу вместимостью 100 мл вносили по 0,1 г флуконазола и тинидазола, растворяли лекарственные вещества в этиловом спирте и этанолом доводили объем жидкости в колбе до метки (V(общ)). К 1 мл полученной смеси добавляли этанол до 25 мл и получали разбавленную смесь. Далее, к 6 мл разбавления прибавляли 4 мл этанола и измеряли оптические плотности при длинах волн 261 нм и 310 нм с помощью спектрофотометра СФ-2000 в кювете с толщиной рабочего слоя 1 см по отношению к этанолу. По полученным значениям оптических плотностей рассчитывали молярную концентрацию флуконазола (С₁) и тинидазола (С₂) по приведенным выше формулам.

Для определения погрешности анализа лекарственных препаратов провели восемь параллельных определений и полученные результаты статистически обработали. Массовую долю и массу тинидазола и флуконазола рассчитывали по формулам:

Где: W(преп) –  массовая доля лекарственного препарата, %; m(преп) – масса лекарственного препарата, г; С(преп) – концентрация лекарственного препарата, моль/л; М(преп) – молярная масса тинидазола (247,27 г/моль) и флуконазола (306,27 г/моль); V(общ) – объем мерной колбы, 100 мл; V - объем лекарственной смеси, 1мл; V₁, V₂, V₃ – фактор (кратность) разбавления, 6 мл, 25 мл и 10 мл, соответственно; а(преп) – навеска лекарственного препарата, 0,1 г.

Относительная погрешность анализа флуконазола равна ±1,74 %, тинидазола – ±1,54 % (табл. 2).

Таблица 2.

Статистическая обработка результатов анализа флуконазола и тинидазола в модельной смеси

Таблица 3.

Результаты анализа лекарственных веществ в модельной смеси

По данным значениям концентраций лекарственных препаратов и приведенным формулам рассчитали массу тинидазола и флуконазола в модельной смеси. Итоги восьми опытов приведены в таблице 3. Масса тинидазола находится в пределах – 0,0897 - 0,0999 г, флуконазола – 0,0852 - 0,1145 г при допустимых отклонениях от 0,085 г до 0,115 г.

Проведенные исследования позволили разработать и предложить способ количественного определения флуконазола и тинидазола в мази «Тинифлукозоль» спектрофотометрическим методом. Методика: к навеске лекарственной формы около 0,1 г (точная масса) добавляют 25 мл этанола и смесь перемешивают до получения дисперсной системы. После растворения лекарственных препаратов полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Далее, к 6 мл полученного фильтрата прибавляют этанол до получения общего объема 10 мл и измеряют оптическую плотность раствора с помощью спектрофотометра при толщине рабочего слоя 1 см при длинах волн 261 нм и 310 нм по отношению к раствору сравнения (этанольная вытяжка геля «Тизоль», полученная аналогичным способом). По значениям оптических плотностей и молярных коэффициентов поглощения находят концентрации лекарственных препаратов в моль/л по приведенным выше формулам. Содержание лекарственных тинидазола и флуконазола в граммах рассчитывают по формуле:

Где: V(общ) - объем этанола, в котором растворена навеска мази, 25 мл; а(мази) - навеска мази, взятая на анализ, г; V₁, V₂ - фактор разбавления, 6 мл и 10 мл, соответственно; P – общая масса лекарственной формы, 10 г.

Для получения достоверных результатов исследования провели восемь параллельных опытов (табл. 4). Из таблицы видно, что ошибка анализа изучаемых лекарственных препаратов в мази находится в пределах допустимых норм в граммах и отклонений в процентах, предусмотренных нормативной документацией [8].

Таблица 4.

Результаты анализа тинидазола и флуконазола в мази

Таким образом, разработанный и предлагаемый способ анализа тинидазола и флуконазола в мягкой лекарственной форме «Тинифлукозоль» может быть рекомендован для включения в нормативную документацию по установлению качества изготовления мази на этапе производства и в процессе ее хранения.