АССОЦИАЦИЯ ФЕНОТИПА ЦИРКУЛИРУЮЩИХ МОНОЦИТОВ С УРОВНЕМ КОРТИЗОЛА КРОВИ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Введение

Одной из важных характеристик организма, определяющих его системный гомеостаз является гормональный статус. Циркулирующие в крови факторы создают определенную информационную среду, которая способна осуществлять функциональную поляризацию иммунных клеток [1, c. 4]. Кортизол – один из важнейших гормонов, влияющих на активность иммунных клеток [2, c. 5-7]. Моноциты представляют собой клетки иммунной системы, задействованные в большинстве процессов формирования и развития злокачественного новообразования. Популяция моноцитов составлена тремя субпопуляциями: классической, неклассической и промежуточной c фенотипом CD14+16-, CD14-16+ и CD14+16+ соответственно [3, c. 1-10]. Кроме рецепторов CD14 и CD16 моноциты экспрессируют рецепторы, связанные со способностью моноцитов участвовать в презентации антигенов, такие как компоненты основного комплекса гистосовместимости HLA-DR. Существуют убедительные данные, доказывающие влияние концентрации кортизола на состояние моноцитов крови [2, c. 1-15]. Однако ранее не было исследовано ассоциации субпопуляционного состава моноцитов с концентрацией кортизола сыворотки крови. В представленной работе был выполнен анализ взаимосвязи содержания кортизола крови с показателями субпопуляционной структуры моноцитов.

Материалы и методы

В исследовании были включены 50 больных раком молочной железы (РМЖ). Диагноз заболевания был верифицирован морфологически. В качестве группы контроля была исследована группа здоровых женщин. Критериями исключения были наличие онкологического заболевания в анамнезе и состояние обострения хронических заболеваний.

В крови больных с РМЖ и группы контроля был выполнен анализ CD14+, CD16+ и HLA-DR+ моноцитов. Для этого у пациенток и доноров была взята венозная кровь в вакуумные системы сбора крови стабилизированные К3-ЭДТА. Для определения субпопуляционного состава моноцитов крови было отобрано 100 мкл фракции лейкоцитов. Далее клетки ресуспендировали в 150 мкл буфера для окрашивания (Cell Staining Buffer, Sony, Япония). Подсчет клеток проводили с помощью автоматического счетчика Luna II (Logos Biosystems, Inc., Корея). Затем к клеточному концентрату добавляли 5 мкл Human TruStain FcX™ (Biolegend, США) для блокирования неспецифического связывания, инкубировали в течение 10 минут. Затем окрашивали набором меченных моноклональных антител против маркеров CD45, CD14, CD16 и HLA-DR. Характеристика антител приведена в таблице 1. Образцы анализировали на проточном цитофлуориметре NovoCyte (ACEA Bioscience, США).

Таблица1.

Антитела и изотипические контроли, применяемые для фенотипирования моноцитов

Уровень кортизола определяли в сыворотке крови больных РМЖ и здоровых женщин с помощью иммуноферментного анализа с использованием коммерческого набора (Вектор-Бест, Россия).

Результаты и обсуждение.

Первоначально в работе была проведена оценка содержания кортизола в сыворотке крови больных и здоровых женщин. Больные РМЖ отличались от здоровых женщин повышенным содержанием кортизола в сыворотке крови (рисунок 1, A). Если в группе здоровых концентрация последнего составила 0,51 мкг/мл, то при РМЖ повышалась до 0,71 мкг/мл, р=0,002 (рисунок 1, A). Для оценки характера взаимосвязи содержания сывороточного кортизола с фенотипическими особенностями моноцитов при РМЖ группа больных была разделена на 2 подгруппы с низким (<Me) и высоким содержанием биологического фактора (≥Me). При этом содержание сывороточного кортизола было связано с фенотипом моноцитов (рисунок 1). В группе больных с содержанием кортизола выше Me доля CD14+CD16-HLA-DR+ моноцитов была выше, чем в группе с показателем ниже Me и составило 78,65 [49,43-100,0] % против 52,5 [48,35-68,31] % (рисунок 1, Б).

Глюкокортикоиды и, в частности, кортизол, являются важными регуляторами функциональной активности клеток иммунной системы, в том числе, моноцитов и макрофагов [4, с. 3-5, 5, с. 4-8]. Так использование их в моделях in vitro для направленной поляризации макрофагов в иммуносупрессивный М2-подтип [6, с. 12]. Кроме того, адаптивный статус больных злокачественными новообразованиями характеризуется как стресс и сопровождается увеличением кортизола в сыворотке крови. Для исследуемой нами группы больных было отмечено увеличение содержания кортизола в крови (рисунок 1, A). Последнее наблюдение совпадает с изменением адаптивного статуса больных. Однако, группа с РМЖ с повышенным содержанием кортизола характеризовались повышением моноцитов с фенотипом CD14-16+HLA-DR+, которые по данным литературы обладают противоопухолевой активностью (рисунок 1, Б). Нами было показано ранее, что именно повышенный уровень моноцитов этой субпопуляции связан с ответом на химиотерапию [7, с. 10-14]. Вероятно, больные РМЖ с локализованным или местно-распространённым процессом (без гематогенных метастазов) обладают способностью отвечать на стресс, характеризующийся повышенным уровнем кортизола, увеличением содержания CD14-16+HLA-DR+моноцитов, которые вносят вклад в терапевтический эффект цитостатического лечения.

Рисунок 1. Ассоциация между содержанием кортизола сыворотки крови и фенотипическими особенностями моноцитов при РМЖ. А. Уровень кортизола в сыворотке крови у больных РМЖ и здоровых женщин; Б. Связь между содержанием кортизола и CD14-16+HLA-DR+ моноцитов у больных РМЖ

Заключение.

Таким образом, группу больных РМЖ отличает повышенное содержание кортизола в крови. При РМЖ уровень кортизола крови ассоциирован с количеством моноцитов CD14-16+ популяции, экспрессирующих рецептор HLA-DR+.

Работа выполнена при поддержке РНФ, грант номер 22-25-00435.