Критерий аллергенности и производственной пыли хлопчатобумажного комбината
Секция: Медицина и фармацевтика
XLVII Студенческая международная заочная научно-практическая конференция «Молодежный научный форум: естественные и медицинские науки»
Критерий аллергенности и производственной пыли хлопчатобумажного комбината
РЕЗЮМЕ.
Установлены аллергенные свойства производственной пыли на эксперименте на кроликах. Аллерген состоит из пяти антигеннных компонентов и имеет общие детерминанты с аллергеном пыльцы хлопчатника.
Проблема профессиональной аллергии носит глобальный характер, о чем свидетельствует его рост в течении последних нескольких десятилетий. Увеличение удельной частоты различных клинических форм аллергии связано высокой концентраций пылевых аллергенов в воздухе и их попадания ингаляционным путем в верхние дыхательные пути.
В связи с этим возникает необходимость проведения экспериментальных исследований, направленных на выяснение характера и природы пылевых аллергенов, встречающихся на различных промышленных предприятиях.
Вышесказанное позволяет изучить состав производственной пыли хлопчатобумажного комбината и определить его антигенные свойства. Решение данного вопроса проводилось путем:
a) выявления уровня специфических преципитирующих антител в сыворотке крови кроликов, иммунизированных экстрактом производственной пыли;
b) изучения специфичности иммунных реакций, вызываемых аллергеном производственной пыли;
c) уточнения антигенного состава аллергена из производственной пыли.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Объектом исследования служила производственная пыль Андижанского хлопчатобумажного объединения. Производственную пыль собирали в чесальном, трепальном, ткацком, мотальном и пробойно-шлихтовальном цехах, где содержание пыли в воздухе находилось в пределах от 4,65 до 9,0 мг/м3.
Экстракт из производственной пыли (аллерген), готовили по общепринятой методике с учетом современных требований.
Экстрагирование проводили в течении 21 часа при температуре + 4С° на Шюттль-аппарате, консервантом служил фенол. Приготовленный экстракт проверяли на чистоту (прозрачность, стерильность и токсичность, содержание посторонних взвешенных частиц).
Антигенные свойства аллергена из производственной пыли изучили на 15 кроликах-самцах, массой тела 1,2–1,6 кг (опытных – 12, контрольных – 3). Процесс иммунизации кроликов состоял из трех курсов с месячным перерывом:
Первый курс иммунизации проводилось еженедельно, подкожно путем введения аллергена из расчёта 3-5 мг в адъюванте Фрейнда в соотношении1:1.
Второй курс иммунизации проводился по той же схеме. Третий курс иммунизации проводился по схеме: 1-й день-внутрибрюшинно, 2-й и 3-й дни внутримышечно. Курсы иммунизации повторяли до 4–5 раз. Контрольные животные в том же режиме получали адъювант Фрейнда.
Специфические преципитирующие антитела в сыворотке крови кроликов, иммунизированных аллергеном производственной пыли, определяли методом двойной радиальной иммунодиффузии в двух модификациях: 1) микрометодом (на предметных стёклах), 2) макрометодом (в чашках Петри).
В центральную лунку наносили антисыворотку, а в периферийные аллерген производственной пыли. Учёт реакции проводили через 72 часа (при микрометоде) и 7 дней (при макрометоде).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Проведенные исследования показали отсутствие специфических преципитирующих антител в сыворотке крови интактных кроликов. Об этом свидетельствовали отрицательные результаты реакций двойной радиальной иммунодиффузии, проведенных с 30 сыворотками 15 интактных кроликов.
Иную картину наблюдали у кроликов, иммунизированных аллергеном из производственной пыли. Первая (слабая) линия преципитации между лункой, заполненной сывороткой крови иммунизированных кроликов и аллергеном из производственной пыли, появилась через две недели от начала первого курса иммунизации у 6 из 12 опытных кроликов (50%). Через 1 месяц от начала иммунизации по одной линии преципитации появилось у остальных 6 опытных кроликов. Через 2 месяца от начала иммунизации продолжали выявляться более чёткие линии преципитации, что указывало на нарастание титра преципитирующих антител.
Наряду с этим у 9 опытных кроликов выявлялись дополнительные (вторые) линии преципитации.
Через 3 месяца от начала первого курса иммунизации появлялась третья линия преципитации, которая в дальнейшем, становилась все более выраженнее при увеличении срока иммунизации и проведении повторных курсов иммунизации. Увеличивалось также их толщина. К 4–5 месяцам иммунизации всего появились 5 линий преципитации (рис. 1).
У всех контрольных животных линии преципитации отсутствовали.
Рисунок 1. Антигенный состав производственной пыли
· антисыворотка против аллергена производственной пыли – (1:2);
· исходный раствор (не разведённый аллерген) – (1:4);
· двухкратные разведения аллергена – (1:8);
· адъювант Фрейнда – (1:16).
Для выяснения титра преципитирующих антител ставили отдельные серии опытов с различными (двухкратными разведениями) аллергенами из производственной пыли. Выяснилось, что после 3-х курсов иммунизации (через 5 месяцев от начала введения антигена) титр антител увеличивался и достигал разведения 1:256.
Иммунные реакции, вызываемые аллергеном производственной пыли являются специфичными.
Об этом свидетельствуют: заполнение центральной лунки антисывороткой (против аллергена производственной пыли) и периферийных лунок аллергенами из производственной пыли, пыльцой айлантуса, пыльцой грецкого ореха и чинары линии преципитации выявлялись только на границе между лунками с аллергеном из производственной пыли и антисывороткой против него.
Между другими лунками линии преципитации отсутствовали. Специфичность иммунных реакций производственной пыли (аллергена) свидетельствуют также опыты, поставленные с аллергеном комаров. Для этой цели центральную лунку заполняли смесью, состоящей из равных частей антисыворотки (против аллергена производственной пыли) и аллергена комаров. Периферийные лунки заполняли аллергеном производственной пыли и аллергеном комаров. Между лунками образовались линии преципитации, которые не сливались, а перекрещивались.
Для выяснения общих антигенных детерминант аллергенов из производственной пыли и пыльцы хлопчатника ставили отдельные опыты. Центральную лунку заполняли антисывороткой аллергена производственной пыли, а периферийные лунки аллергеном из производственной пыли и аллергеном пыльцы хлопчатника. Между центральной лункой и периферийными лунками образовались линии преципитации, одна из которых оказалась длиннее и продолжалась за другой в виде так называемой «шпоры», что возможно свидетельствует об общих детерминантных группах аллергенов, образующих с соответствующими антителами иммунные комплексы.
Таким образом, экстракт из производственной пыли хлопчатобумажного комбината обладает чётко выраженными аллергенными свойствами, что подтверждается наличием преципитируюших антител в сыворотке подопытных животных (кроликов). Аллерген состоит из пяти антигенных компонентов и имеет общие детерминанты с аллергеном пыльцы хлопчатника.