Изучение биологических свойств и патогенности стафилококков, выделенных при отите у животных-компаньонов

STUDY OF BIOLOGICAL PROPERTIES AND PATHOGENICITY OF STAPHILOCOCES ISOLATED DURING OTITA IN ANIMAL COMPANIES

Alexander Shmelev

Teacher, SBEE SO Syzran medical-humanitarian college, Russia, Syzran

Ekaterina Suldina

Assistant of Ulyanovsk State Agrarian University, Russia, Ulyanovsk

Аннотация. В статье представлены результаты изучения видового состава бактерий рода Staphylococcus при наружных отитах у собак. Рассмотрены биологичские свойства выделенных микроорганизмов, их патогенность и устойчивость к антимикробным препаратам.

Abstract. The article presents the results of studying the species composition of bacteria of the genus Staphylococcus in otitis externa in dogs. The biological properties of the isolated microorganisms, their pathogenicity and resistance to antimicrobial drugs are considered.

Ключевые слова: отиты; Staphylococcus; резистентность; антибиотикоустойчивость; стафилококки; биологические свойства.

Keywords: otitis media; Staphylococcus; resistance; antibiotic resistance; staphylococci; biological properties.

Наружные отиты являются одной из самых распространенных патологий у собак [1-2]. Их возбудителями могут быть бактерии, дрожжеподобные и плесневые грибы, а также грибково-бактериальные ассоциации [3]. Часто болезнь переходит из вялотекущего или острого состояния в хроническую форму, а длительность его может достигать 3 и более лет [4]. Значимый вклад в длительное присутствие микроорганизмов в макроорганизме вносят секретируемые факторы персистенции [5].

Однако, зачастую, у микроорганизмов, выделяемых при данном заболевании, изучают только антилизоцимную активность [6].

Значимую роль в патогенезе наружных отитов играют симбиотические взаимоотношения микроорганизмов [4]. В подобных случаях многими исследователями [7-8] существенным признается установление у выделенных культур факторов персистенции и патогенности, а также оценка характера взаимоотношений, складывающихся между членами микробных сообществ. 

В последние годы работы исследователей направлены на решение вопроса оптимизации схемы лечения отитов, поскольку применение рекомендуемых антибактериальных препаратов на практике, часто не дает желаемых результатов в борьбе с патогенами, а проблема устойчивости возбудителей приобретает все большую значимость [9-10].

Одним из наиболее часто встречающихся микроорганизмов при этой отите у животных, являются стафилококки.

Связи с этим целью настоящего исследования является изучение биологических свойств и патогенности стафилококков, как наиболее часто встречающихся микроорганизмов, выделяемых при наружных отитах у животных-компаньонов.

Для реализации поставленной цели были решены следующие задачи:

1.Выделить стафилококки из наружного слухового прохода у собак с отитами, и определить их видовую принадлежность.

2. Изучить биологические свойства бактерий рода Staphylococcus, в т.ч. патогенность.

3. Охарактеризовать чувствительность стафилококков, выделенных при наружных отитах у собак, к антимикробным средствам.

Материалы и методы. В работе были исследованы штаммы микроорганизмов, выделенных от 6 собак больных наружным отитом, и находящихся на лечении. Порода, возраст, половая принадлежность, условия содержания разнились.

Питательные среды и реактивы: МПА с добавлением 5% дефибринированной крови барана, желточно-солевой агар Чистовича. молочно-солевой агар Петрович, среда для накопления стафилококкового энтеротоксина, агар Ваird – Раrkег, среда Чепмен, фенилэтаноловый агар.

Микро-ГРАМ-НИЦФ набор реагентов для окраски микроорганизмов по методу Грама ТУ 9398-002-39484474-2002 (ЗАО НИЦФ, РФ), Набор СТАФИтест 16.

Оборудование и лабораторная посуда: термостат ТС-80М-2, автоклав ГК-100-3, шкаф сушильно-стерилизационный ШСС-80п УХЛ 42, холодильник бытовой “Бирюса” СПО 4М1-16-4М1, дистиллятор, микроскоп «Биомед-6» с видеофотонасадкой. Комплект лабораторной посуды.

Исследуемый материал получали методом смывов с помощью тампона из наружного слухового прохода собак.

Для выделения и идентификации микроорганизмов проводили микроскопию и посев материала на специальные питательные среды.

Выделение чистой культуры возбудителя осуществляли с учетом его культуральных особенностей: галофильности, высокой потребности в белках и углеводах.

При выполнении исследования учитывали возможности отклонения от типичной характеристики стафилококков.

Идентификацию выделенных чистых культур проводили, используя набор СТАФИтест 16 предназначенный для идентификации широкого ряда стафилококков и родственных грамположительных кокков (Мicrососus, Stomatococcus и др.), согласно инструкции по его применению.

Определяли основные показатели вирулентности стафилококков: гемолитическая активность, выработка фермента плазмокоагулазы, некротоксичность.

В качестве дополнительных тестов изучали фактор скучивания (Сhumping factог-СF) эритроцтов, определение фибринолизина (стрептокиназа), лецитиназы, протеина «А» и ДНК-азной активности.

Чувствительность к антимикробным препаратам бактерий определяли методом диффузии в агар с помощью бумажных дисков, пропитанных противомикробными препаратами.

Результаты исследований. В результате проведенных исследований по выделению бактерий рода Staphylococcus было изолировано 6 штаммов стафилококков от 6-ти собак.

Изоляты стафилококков были грамположительными, имели сферическую форму, располагались в мазках скоплениями, напоминающими виноградные грозди, и имели типичные для соответствующих видов культуральные и ферментативные свойства.

Использование системы СТАФИтест 16 позволило определить видовую принадлежность выделенных микроорганизмов рода Staphylococcus.

Проведенный анализ видового состава стафилококков, выделенной из наружного слухового прохода у собак с отитами, показал, что наибольшая значимость принадлежит микроорганизмам вида Staphylococcus hyicus (50%), Второе место занимают бактерии вида Staphylococcus intermedius (33,3%). Один штамм из 6-ти принадлежал виду Staphylococcus gallinarum, что составило 16,7%.

Проведенные исследования по изучению факторов вирулентности свидетельствуют о том, что большинство изучаемых штаммов обладали сразу несколькими факторами патогенности.

Наибольшую вирулентную активность по изучаемым свойствам показали все три штамма Staphylococcus hyicus и штамм Staphylococcus intermedius ст.5/1.

Штамм Staphylococcus intermedius ст.5/1 не обладал лишь лейцитиназной активностью. Изолят стафилококков Staphylococcus gallinarum ст.8/2 не обладал способностью вырабатывать гемолизин, лейцитиназной активностью и фактором скучивания (Сhumping factог-СF). Кроме того, этот штамм коагулировал плазму крови кроликов лишь за 24 часа, тогда как остальные изоляты проявляли плазмокоагулирующую активность в течении 3-6 часов. Все это свидетельствует о невысоком вирулентном потенциале изучаемого штамма Staphylococcus gallinarum.

Важным моментом при подборе терапевтических средств для лечения отитов у собак является подбор антимикробных препаратов для уничтожения возбудителя воспалительного процесса. Для этого нами была изучена чувствительность/резистентность выделенных и идентифицированных стафилококков к антибиотикам. Чувствительность/устойчивость бактерий рода Staphylococcus определялась к бензилпенициллину, оксациллину, эритромицину, клиндамицину, ципрофлоксацину, левофлоксацину, гентамицину, ванкомицину, цефтриаксону, азитромицину.

Полученные результаты показали, что все изучаемые штаммы бактерий рода Staphylococcus были устойчивы к бензилпенициллину (100%), к эритромицину и азитромицину – 50%, к оксациллину и ванкомицину и клиндамицину – 33,3%, к цефтриаксону, ципрофлоксацину, левофлоксацину и гентамицину –16,6%.

Наиболее эффективным препаратами из изученных антибиотиков были цефтриаксон, ципрофлоксацин, левофлоксацин и гентамицин.