Применение современных технологий в определении ВИЧ статуса

ВИЧ-инфекция - болезнь, возникающая при заражении ретровирусом, имеет длительный скрытый период, неуклонно медленно прогрессирует и в конечной стадии – СПИДа - заканчивается смертью. Эпидемию болезни, как огромную опасность здоровью человечества можно остановить. Для достижения этого к 2030 году число новых ВИЧ-инфекций и смертей, обусловленных СПИДом, необходимо будет снизить на 90% по сравнению с 2010 годом. Одним из основных направлений достижения этой цели ЮНЕЙДС выдвигает выявление 90% всех инфицированных лиц.

От начала появления болезни, специалисты разных направлений, внесли весомый вклад в борьбе с болезнью: разработаны эффективные способы диагностики, противоэпидемические мероприятия, новые лечебные препараты и технологии.

Дали результаты и многолетняя информационная работа. Сегодня каждый грамотный человек хотя бы в общих чертах осведомлен о СПИДе и мерах по профилактике. Но, несмотря на всю проделанную работу, эпидемиологическая ситуация по ВИЧ/СПИДу продолжает оставаться серьезной.

В 2016 г. в России зарегистрировано более 1 млн. случаев ВИЧ. На 1 октября 2016 г. в Республике Саха (Якутия) зарегистрировано 1872 ВИЧ- инфицированных, причем выявленных граждан РФ в 2016 г. находится выше аналогичного периода 2015 г. в 1,5 раза.

Наибольший удельный вес ВИЧ- инфицированных приходится на возрастную группу 20-29 лет (45,7%). Эти люди могли бы более длительное время участвовать в трудовой деятельности, могли бы внести свой вклад в развитие любой сферы деятельности.

От момента заражения ВИЧ до развития СПИДа может пройти от 2-3 до 10-15 лет. Начиная с момента инфицирования человек способен передавать вирус другим людям. ВИЧ поражает важные клетки иммунной системы, Т-лимфоциты. В результате защитные свойства организма человека медленно, но необратимо снижаются. По внешнему виду невозможно определить инфицирован он ВИЧ или нет, т.е. зараженный человек в этом периоде практически здоров. Пока еще здоровая иммунная система начинает вырабатывать антитела к вирусу. На выявлении их в крови и основано тестирование на ВИЧ. Антитела к ВИЧ в достаточном для обнаружения количестве вырабатываются в течение 2-12 недель после заражения. Когда вирус в организме уже есть, но антитела еще не обнаружены, называются «периодом окна». В период «окна» тест на ВИЧ будет отрицательным, но инфицированный человек уже способен заражать других людей. Своевременное выявление ВИЧ-инфицированных людей чрезвычайно важно: они могут получать соответствующее лечение и принять меры, чтобы не быть источником заражения здоровых людей.

В настоящее время существует 4 группы методов лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, направленных на выявление:

·     Вируса в биологических жидкостях

·     Вирусных антигенов

·     Антител к ВИЧ: ИФА, иммуноблотинг

·     Генетического материала ВИЧ:

Наиболее широко используются методы, направленные на обнаружение антител к ВИЧ. Серологическая диагностика осуществляется в специализи­рованных лабораториях в два этапа: на первом этапе выявляют антитела против антигенов ВИЧ с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). На втором этапе в качестве подтверждающего теста используют метод иммунного блотинга, который позволяет определить антитела к отдельным белкам вируса. При этом необходимо учитывать данные эпидемиологического анамнеза, иммунологических тестов и результатов клинического обследования.

Тестирование на ВИЧ-инфекцию может быть обязательным и добровольным.

Обязательному тестированию на антитела к ВИЧ подлежат: доноры органов, биологических жидкостей; врачи, средний и младший медицинский персонал привлекаемый к непосредственному обследованию, диагностике, лечению, обслуживанию и к другой работе с инфицированными ВИЧ, имеющие с ними непосредственный контакт.

Добровольное медицинское тестирование: при желании пациента получить помощь, касающуюся профилактики передачи или заражения ВИЧ; при наличии медицинских показаний, выявленных при обследовании и лечении пациента; для профилактики передачи ВИЧ от матери ребенку. В то же время само тестирование должно проводиться только после получения согласия пациента и строго конфиденциально.

Любой гражданин Российской Федерации может обследоваться на наличие у него антител к ВИЧ:

·     добровольно (п. 3 ст. 7 Закона № 38-ФЗ);

·      бесплатно в учреждениях государственной и муниципальной систем здравоохранения (п. 7 ст. 7 Закона № 38-ФЗ);

·      анонимно по желанию (п. 2 ст. 8 Закона № 38-ФЗ).

Иммуноферментный анализ (ИФА) является основным, наиболее широко применяемым методом определения общих антител к вирусам. Принцип метода основан на выявлении комплекса антиген – антитела с помощью фермента по изменению окраски специфического субстрата. Наиболее широко применяются непрямой и конкурентный варианты.

Отрицательный результат теста ИФА может означать:

·     человек не инфицирован ВИЧ;

·     возможно инфицирован, но с момента заражения прошло еще недостаточно времени и антитела к ВИЧ еще не выработаны организмом (период «окна»). Чтобы рассеять сомнения необходимо повторить тестирование через 3-6 месяцев.

Положительный результат теста ИФА указывает на вероятность заражения ВИЧ. Он может быть: отрицательным, положительным, неопределенным.

При постановке ИФА в случае получения положительного результата анализ проводят еще 2 раза, с той же сывороткой от больного. При получении хотя бы еще одного позитивного результата диагностика ВИЧ - инфекции продолжается более специфичным методом иммунного блотинга (ИБ). Принцип метода заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса. Отрицательный результат теста иммунного блотинга говорит о том, что метод ИФА дал ложно-положительный результат; человек не инфицирован, либо анализ сдан в период «окна». Положительный результат теста иммунного блотинга подтверждает, что в крови обнаружены антитела к ВИЧ. Только после положительного результата в ИБ возможно заключение об инфицированности ВИЧ. Иногда результаты теста могут быть неопределенными. В таких случаях необходимо пройти обследование и наблюдение у врача инфекциониста, а также через 1,3, и 6 месяцев повторить анализы.

В настоящее время во многих городах России проводятся акции бесплатного анонимного экспресс - тестирования населения (результат выдается через 15 минут) на предмет выявления ВИЧ- инфекции. Акции направлены на то, чтобы напомнить населению об угрозе ВИЧ\СПИД, в связи с продолжающимся ростом этой инфекции.

Мы, студенты Якутского медицинского колледжа, ежегодно принимаем участие в подобных мероприятиях, которые обычно приурочены к «Всемирному дню борьбы со СПИДом» и «Памяти умерших от СПИД». Активно сотрудничаем с ГБУ РС (Я) «Центр СПИД» г. Якутска.

На этот раз отдел профилактики центра предложил привлечь студентов, выпускного, третьего курса отделения «Лабораторная диагностика». Оказать практическую помощь в тестировании населения экспресс методом диагностики ВИЧ - инфекции четвертого поколения.

Вне урочное время волонтерская группа из шести человек прослушала теоретический семинар, на котором получили дополнительные, базовые знания:

Тест способен определить признаки ВИЧ-инфекции на более раннем сроке чем экспресс - тесты третьего поколения, включая наиболее опасную для окружающих- острую стадию инфицирования.

Третье поколение выявляет только антитела - ответную реакцию организма на вирус. Антитела появляются всегда с некоторой задержкой после инфицирования - организму нужно время, чтобы их выработать. Обычно этот период занимает 3-6 недель после инфицирования- это так называемый «период окна».

Четвертое поколение выявляет как антитела, так и антиген р24- фрагмент самого вируса ВИЧ. Тест четвертого поколения показывает положительный результат, когда концентрация вируса становится достаточной для его обнаружения, в большинстве случаев это происходит еще до появления антител. Это особенно важно, поскольку наибольший риск передачи ВИЧ приходится именно на раннюю стадию.

Важно отметить, что диагностика четвертого поколения определяет ВИЧ в острой стадии инфицирования - когда вирус уже находится в крови и сперме зараженного человека в большой концентрации, а антител еще нет. Вероятность передачи вируса половым путем от человека на острой стадии инфекции оценивается в 10 раз выше, чем от людей с хронической ВИЧ-инфекцией. При этом проверка человека в острой фазе диагностикой третьего поколения выдаст отрицательный ответ.

Производитель теста ВИЧ антиген \ антитело Детермин Комбо – Япония, аналогов которому на российском рынке нет. Простой быстрый иммунохроматографический тест для одновременно качественного выявления р24 антигена ВИЧ и антител к ВИЧ-1, ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2 в сыворотке, плазме или цельной крови.

Под контролем сотрудников «СПИД центра» получили и практический инструктаж постановки теста Детермин ВИЧ с цельной кровью, соблюдая следующие этапы:

· отделить по перфорации тест-полоску: отрывать следует с правой стороны карты, начиная сверху, с тем, чтобы на карте сохранялся номер серии, напечатанный на левой стороне карты.

· удалить защитную фольгу

· нанести тестируемую кровь: 50 мкл полученной из пальца цельной крови на стартовую зону тест - полоски (помечена стрелками). Подождать 1 минуту.

· добавить буфер: 1 каплю из капельницы на стартовую зону тест - полоски (капельница строго вертикально). Подождать 15 минут.

· прочесть результат: зона чтения результата теста (линия АГ р 24, линия АТ к ВИЧ).

Получив практические навыки приняли участие в молодежной акции проводимой ГБУ РС (Я) «Центр СПИД» по добровольному, бесплатному экспресс - тестированию на ВИЧ. В рамках декады посвященной 1 декабря «Всемирному дню борьбы со СПИДом» среди студентов и преподавателей Северо-Восточного федерального университета им. М.К. Аммосова, на базе клиники Медицинского института в декабре 2016 года. Соблюдая технику выполнения тестирования, самостоятельно обследовали 88 студентов, у всех тест отрицательный.

В январе – феврале 2017г., под контролем сотрудников центра СПИД, выезжали на рабочие места в транспортные организации для тестирования экспресс методом. Тестировались рабочие, водители, кондукторы и другие служащие предприятий. Обследовано 212 человек у всех тест отрицательный.

Таким образом, изучив и освоив экспресс тест диагностики ВИЧ-инфекции нового поколения мы имеем возможность снизить продолжительность диагностического периода в ввиду сокращенного алгоритма действий.

Определить вирус ВИЧ на ранних стадиях болезни, что позволит как можно раньше начать лечение, замедлить развитие болезни.

Привлечь наибольшее число обследуемых людей, в том числе молодежи, в условиях не требующих специального посещения лаборатории.

Убедились в том, что метод действительно является быстрым и простым в использовании.